茎尖组织培养产生脱毒甘薯苗的组织培养技术

人气 1301   2005-6-21 10:10

①取材。选择需要进行脱毒的甘薯品种,大田收获后彻底清洗消毒,排种在干净的消毒过的细沙、沙+土或蛭石中,保持28~32℃左右,经常湿润,促其发芽,当薯块幼苗长至 10~15厘米(2~3周时间)时可切取顶端做茎尖组织培养

②消毒。切取茎尖2~3厘米长,先用0.1%的洗衣粉搅洗5~10分钟,然后用自来水冲洗30分钟。随后在超净工作台上用70%的酒精浸泡半分钟,再用5%的次氯酸钠(NaOCl)溶液消毒10分钟,无菌蒸馏水清洗3次。

③切取茎尖。在无菌操作条件下,将消毒过的茎尖置于体视解剖镜下,用解剖刀削去小叶片,切取附带1~2个叶原基的茎尖,长约0.2~0.4毫米。

④接种。将长约0.2~0.4毫米的茎尖用经酒精灯火焰消毒的枪状镊接种到培养试管中,管内装有0.7%琼脂固化的附加适量激素的MS培养基,然后用铝泊纸盖上管口,置人温度 28~30℃、光强3 000~4 000勒克斯、光照16小时的培养室内培养试管苗。

⑤转管。7~14天,待茎尖分生组织转绿并分化出芽后,转移到不加激素的1/2MS培养基上生长,培养条件为温度 26~28℃、光强1 000~1 600勒克斯、光照14小时,经2~3个月后茎尖分生组织将长成具有2~3个叶片的完整植株。

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